мощных оптических систем, введение иммерсионных, или погружных систем) дало возможность Б. чрезвычайно расширить область своего исследования и в высокой степени уточнить последнее.
Техника обработки и, исследования бактерий. Препараты микробов приготовляются размазыванием по поверхности покровного или предметного стекла подлежащего исследованию материала. До рассматривания в микроскоп препарат обыкновенно высушивается, фиксируется и окрашивается. Фиксация и окраска микробов связаны, однако, с опасностью образования искусственных продуктов обработки и извращения естественного вида клетки и нормальных элементов ее строения. Здесь может оказать услуги прижизненная окраска микробов безвредными для них красками (метиленовая синька, нейтральрот и др.) в очень сильных разбавлениях, а для крупных видов — исследование микробов в неокрашенном виде. В последнем случае применяют метод «висячей капли»: на покровное стеклышко наносится небольшая плоская капля жидкости, содержащая микробов, затем стеклышко каплей вниз накладывается на предметное стекло с вышлифованным углублением посредине (рис. 1) так, чтобы капля свободно свисала в углу бление предметного стекла, не касаясь ни краев, ни дна его. Края выемки Рис. 1. Предметное стекло предварительно с выемкой для исследования смазывают ваземикробов в висячей капле. лином, к к-рому плотно прижимают края покровного стеклышка. Капля, т. о., оказывается герметически заключенной во влажной камере.
Препарат рассматривают сначала при слабом увеличении, а затем с иммерсионной системой.
Гораздо чаще микробы исследуются в окрашенном состоянии. Метод окраски препаратов был предложен в 1871 Вейгертом и разработан, в особенности, Кохом. Для приготовления препарата исследуемую жидкость наносят тонким слоем на покровное стеклышко и высушивают на воздухе. Затем препарат фиксируется тройным проведением через пламя газовой горелки или погружением в спирт, эфир, осмиевуд) кислоту, хромовую кислоту и др. жидкости. Цель фиксации — убить микробов и сделать их восприимчивыми к окраске (живые микробы окрашиваются плохо), а также закрепить их на стекле. Фиксированный препарат, отмытый от фиксатора, захватывается пинцетом Корнэ и обливаётся раствором краски. Окрашивание длится различное время в зависимости от свойства краски и от особенностей препарата; иногда его производят с нагреванием.
Краска, затем смывается, препарат основательно промывается водой и рассматривается в воде, глицерине или канадском бальзаме. Препарат можно готовить и непосредственно на предметном стекле, чтобы затемрассматривать его без покровного стеклышка. Некоторые микробы. весьма плохо воспринимают окраску. Красящая способность всех вообще красок усиливается от нагревания и прибавления к ним небольших количеств щелочи, анилиновой воды или карболовой кислоты.
Со времени классических исследований Пастера центр тяжести микробиологических работ был перенесен на изучение химизма микробов и на выяснение их роли в круговороте веществ, совершающемся в природе.
Для этого необходимо было выработать рациональные методы получения чистых культур микробов и научиться длительно поддерживать их в ряде последовательных поколений (генераций). Чтобы уверенно цзучать химизм живого реактива — микроба, столь же важно иметь его в чистом виде, как при работе с обычными химическими реактивами необходимо освободить их от всяких примесей. Исторически первым методом изолирования микробов был «метод разбавления» жидких сред, содержащих микробов, — метод, / впервые предло
аЬсdе женный Пастером и широко примененный знамени-, тым англ. хирургом Листером при изучении молочнокислых бактерий (рис. 2). Однако, метод этот, простой и верный по идее, Рис. 2. Схема метода далеко не всегда разбавлений (в пробирке приводит к поло
а мы имеем три вида путем постежительным резуль
бактерий; разбавления татам. Главное за
пенного среды — Ь, с — ^бактерии труднение состоит разделяются, что должно привести в том, что, благо
вк конце-концов получению чистой даря существова
культуры каждого из нию вокруг тела трех видов — d, е, /). многих микробов слизистой оболочки, весьма затрудняется механическое разъединение склеившихся масс микробов, так что разводка, несмотря на большие разбавления и энергичное встряхивание жидкости, все же остается смешанной. Дело изолирования микробов стало на твердую почву лишь с тех пор, как Роберт Кох в 1881 ввел в микробиологическую практику плодотворный принцип изолирования микробов на плотных средах. Можно смело утверждать, что в области практической микробиологии ни одно из открытий по своему значению не может сравниться с этим гениальным по простоте принципом плотных сред. Он основан на том, что зародыши микробов, попавшие при посеве на определенное место плотного субстрата, не могут, как в жидкости, рассеиваться по всей среде, но прорастают и размножаются каждый на своем месте, образуя видимые простым глазом скопления мириадов особей одного и того же вида в форме колоний (рис. 3).
Если колонии достаточно удалены друг от друга (а этого всегда можно достигнуть соответственным разведением посевного материала), то отвивкой от них в пробирки
